Skip to content

Retencja CXCR4 w retikulum endoplazmatycznym blokuje rozprzestrzenianie się hybrydomy komórek T. ad 7

1 miesiąc ago

794 words

W związku z tym chemokina skoniugowana z KDEL może zapobiegać dostaniu się więcej niż jednego receptora na powierzchnię. Jednak do tej pory SDF-1 jest jedynym znanym ligandem, który wiąże się z CXCR4 z wysokim powinowactwem (34, 35). Ponadto fakt, że myszy z niedoborem SDF-1 (3 i myszy z niedoborem CXCR4 wykazują identyczne defekty hematopoetyczne i sercowe (36, 37) również potwierdza pogląd, że CXCR4 jest jedynym receptorem SDF-1. Niemniej jednak nie można całkowicie wykluczyć, że drugi receptor SDF-1 istnieje i jest wyrażany przez komórki T. To wpłynęłoby tylko na nasze wnioski, gdyby ten hipotetyczny receptor wiązał się również z innymi chemokinami. Swoistość efektu SDF-1-KDEL wykazuje migracja transfektantów w kierunku chemokiny TARC (32, 38), która była podobna do tej w kontrolnych komórkach. Pokazuje to, że na odpowiednie szlaki sygnałowe dzielone przez dwa chemokiny nie wpłynęło wprowadzenie konstruktu SDF-1-KDEL lub desensytyzacja heterologiczna i że mechanizm migracji był wciąż nienaruszony. Rozważaliśmy również możliwość, że wiązanie SDF-1-KDEL z CXCR4 indukuje sygnały, które mogą powodować homologiczną regulację w dół ścieżek nie dzielonych z TARC. Crump i wsp. wykazali, że mutant SDF-1, w którym N-końcowa lizyna dojrzałego peptydu została zmieniona na argininę, nadal wiąże się z CXCR4, ale nie wyzwala sygnalizacji (33). Transfekowaliśmy konstrukt SDF-1-KDEL z tą mutacją do hybrydomy komórek T. W tym przypadku uzyskane poziomy ekspresji nie były wystarczająco wysokie, aby całkowicie tłumić funkcję CXCR4, jak pokazano przez redukcję, ale nie utratę wiązania SDF-1. Niemniej jednak, zarówno chemotaksja w kierunku SDF-1, jak i inwazja w monowarstwy fibroblastów były zasadniczo tłumione, a także zdolność rozsiewania została silnie zmniejszona, argumentując przeciwko wpływowi indukowanych sygnałów SDF-1-KDEL .. Inna możliwość polega na tym, że wprowadzenie białka z sygnałem zatrzymania ER (KDEL) wewnątrz komórki ma niespecyficzne działanie ze względu na zajęcie zbyt wielu receptorów KDEL. Aby wykluczyć tę możliwość, inną intrakinę, TARC-KDEL, transdukowano do komórek TAM2D2. To białko TARC-KDEL powinno zachowywać CCR4, receptor dla TARC (32), wewnątrz komórki. W rzeczywistości migracja w kierunku TARC została całkowicie zablokowana, podczas gdy migracja do SDF-1 nie była. Inwazja w monowarstę fibroblastów transfektanta TARC-KDEL była podobna w porównaniu z komórkami kontrolnymi. Było to oczekiwane, ponieważ inwazja jest całkowicie zależna od sygnalizacji CXCR4, i to nie było zablokowane, jak pokazano w teście migracji. Transfektanty TARC-KDEL badano następnie pod kątem tworzenia przerzutów in vivo. Cztery z 6 myszy zmarły w ciągu 6 tygodni, w tym samym czasie i z tym samym wzorem przerzutów jak myszy, którym wstrzyknięto komórki kontrolne. Fakt, że wszystkie te myszy miały przerzuty do wątroby i śledziony i zmarł w tym samym czasie co myszy kontrolne, argumentuje przeciwko ogólnemu efektowi KDEL. Tak więc, blok rozprzestrzeniania obserwowany po wstrzyknięciu klonów SDF-K7 i SDF-K17 może być konkretnie przypisany do usuwania CXCR4 z powierzchni, a nie do ogólnego efektu sekwencji KDEL. Inwazja na zarodkowe monowarstwy fibroblastów została całkowicie zablokowana w transfektantach SDF-1-KDEL, co potwierdza silną korelację tej inwazji z rozprzestrzenianiem tych komórek, co wielokrotnie wykazano (4. 7). Te fibroblasty wytwarzają SDF-1, jak testowano za pomocą RT-PCR (dane nie pokazane), i najwyraźniej SDF-1 jest obecny na powierzchni komórki, prawdopodobnie związany z proteoglikanami. Aby wykazać, że inwazja jest zależna od SDF-1 i że brak zdolności inwazyjnej w transfektantach SDF-1-KDEL wynika wyłącznie z utraty CXCR4, fibroblasty były wcześniej traktowane TARC. Założono, że TARC będzie wiązać się z proteoglikanami i wywoływać inwazję w transfektantach SDF-1-KDEL. Rzeczywiście, komórki dokonały inwazji na monowarstwy wstępnie traktowane TARC, ponownie pokazując, że wymagane szlaki sygnałowe były nadal nienaruszone. Jednak ta inwazja była stosunkowo skromna. Częściowo może to być spowodowane słabszym sygnałem, na co wskazuje niższa chemotaksja indukowana przez takie same wysokie (100 ng / ml) stężenia TARC i SDF-1. Może to być spowodowane niższym poziomem powierzchni receptora TARC CCR4 (38, 39) w porównaniu z CXCR4. Bardziej prawdopodobnym wyjaśnieniem jest to, że rolą SDF-1 w inwazji jest przede wszystkim aktywacja integryny LFA-1 (10). Chociaż TARC może aktywować LFA-1 (40), jest on wyraźnie mniej skuteczny niż SDF-1 (41). Rozpowszechnianie zostało całkowicie zablokowane w transfektantach SDF-1-KDEL, co pokazuje, że CXCR4 odgrywa decydującą rolę w rozprzestrzenianiu się hybrydom T komórek. Dalsze badania powinny ujawnić, czy SDF-1 i inne chemokiny, które są konstytutywnie eksprymowane, takie jak BCA-1 i LARC w wątrobie (19, 20), odgrywają podobną rolę w innych nowotworach krwiotwórczych
[podobne: bmi kalkulator dla dzieci, zapalenie migdałków leczenie, laserowe usuwanie zylakow ]
[podobne: ośrodki leczenia uzależnień nfz, piłka do siedzenia przy biurku, olej kokosowy na włosy jak stosować ]