Skip to content

Rekrutacja komórek NK za pośrednictwem chemokin jest kluczowym mechanizmem obronnym gospodarza w inwazyjnej aspergilozie czesc 4

1 miesiąc ago

374 words

Całkowitą liczbę podzbiorów leukocytów obliczono jako iloczyn procentu każdego rodzaju komórek i całkowitej liczby komórek w próbce. Izolacja, kultura i adopcyjny transfer komórek NK. Splenocyty hodowano przy 3 x 106 komórek / ml w DMEM z 10% FCS, antybiotykami, nieistotnymi aminokwasami, indometacyną (0,5 .g / ml), 2-merkaptoetanolem (2,5 .M), mysią IL-12 (mIL-12, ng / ml) i mIL-18 (100 ng / ml) przez 5 dni. Hodowane komórki NK zostały następnie wzbogacone przez zubożenie komórek CD5 +, Ly-6G +, TER-119 +, CD22 + i F4 / 80 + przy użyciu cząstek magnetycznych zgodnie z instrukcjami producenta (Stem Cell Technologies Inc., Vancouver, British Columbia, Kanada). We wstępnych badaniach wyeluowane komórki stanowiły około 95% DX5 + (marker pan-NK) i CD3 .. W niektórych eksperymentach komórki następnie barwiono istotnym barwnikiem cytoplazmatycznym, CFSE (Molecular Probes Inc., Eugene, Oregon, USA), inkubując w 5. M CFSE w PBS z 5% FCS przez 10 minut i przemywając trzy razy. Jednorodne barwienie komórek zweryfikowano za pomocą mikroskopii epifluorescencyjnej przed adopcyjnym przeniesieniem 2 x 106 komórek w 100 ul PBS przez boczną żyłę ogonową w dniu inokulacji. Analiza statystyczna. Dane analizowano przy użyciu komputera Macintosh G3 Powerbook i oprogramowania statystycznego (InStat, wersja 2.01, GraphPad Software for Science Inc., San Diego, Kalifornia, USA). Dane dotyczące przeżycia porównywano za pomocą dokładnego testu Fishera. Wszystkie inne dane wyrażono jako średnią plus lub minus SEM i porównano stosując niesparowany dwustronny test Manna-Whitneya (nieparametryczny). Wartości P uznano za statystycznie istotne, jeśli były mniejsze niż 0,05. Wyniki Wytwarzanie MCP-1 / CCL2 w płucach podczas inwazyjnej aspergilozy i wpływ immuno-neutralizacji na wynik infekcji. Rozpoczęliśmy od pomiaru stężenia białka MCP-1 / CCL2 w płucach normalnych i przejściowo pozbawionych granulocytów obojętnochłonnych myszy, które zostały poddane intracracheally za pomocą konidiów A. fumigatus. Znaleźliśmy wyraźną indukcję poziomów MCP-1 / CCL2 w płucach w odpowiedzi na patogen w 24 i 48 godzin po inokulacji u zwierząt przejściowo neutropenicznych, ale nie stwierdzono mierzalnego wzrostu immunokompetentnych zwierząt (Figura 1). MCP-1 / CCL2 pozostawał niewykrywalny w surowicy z obu grup, co sugeruje, że odpowiedź podzielona na sekcje ograniczona jest do płuc. Rycina Poziomy MCP-1 / CCL2 w płucach po prowokacji dotchawiczym A. fumigatus u zwierząt immunokompetentnych i z neutropenią. Obie grupy zaszczepiono dotchawiczo konidiami, a MCP-1 / CCL2 zmierzono w homogenatach płuc stosując specyficzny test ELISA. * P <0,05 w porównaniu do zwierząt immunokompetentnych w tym punkcie czasowym. Przedstawione dane reprezentują średnią. SEM; n = 6 dla każdej grupy w każdym punkcie czasowym. Zwierzęta pozbawione neutrofili, leczone mAb RB6-8C5. Aby ocenić, czy MCP-1 / CCL2 jest wymagany do obrony gospodarza w aspekcie inwazyjnej aspergilozy, następnie zbadaliśmy wynik infekcji w ustawieniu neutralizacji liganda za pośrednictwem Ab. U myszy zubożonych w neutrofile z inwazyjną aspergilozą, neutralizacja MCP-1 / CCL2 zwiększyła ponad dwukrotność śmiertelności zakażenia, w porównaniu z myszami z niedoborem neutrofili traktowanymi PBS (Figura 2a). Porównaliśmy również obciążenie grzybami w płucach pomiędzy dwiema grupami w dniu 3 po inokulacji za pomocą Aspergillus (Figura 2b). W ustawieniu neutralizacji MCP-1 stwierdzono ponad trzykrotnie wyższą zawartość chityny w płucach w porównaniu z myszami z inwazyjną aspergilozą leczoną PBS, co wskazuje na cięższą infekcję przy ustawieniu neutralizacji MCP-1 / CCL2. Rycina 2 Ocena inwazyjnej aspergilozy u myszy z neutropenią z neutralizacją MCP-1 / CCL2 lub bez niej. (a) Badanie przeżycia; n = 15 dla każdej grupy. (b) zawartość chityny płucnej po prowokacji dotchawiczym A. fumigatus w dniu 3 po iniekcji do tchawicy konidiami. Dane reprezentują średnią. SEM n = 6 dla każdej grupy. * P <0,05 w porównaniu z zakażonymi myszami z niedoborem komórek polimorfojądrowych (PMN). Zubożenie PMN oznacza myszy leczone RB6-8C5 i PBS; Zubożanie PMN / neutralizacja MCP-1 wskazuje myszy leczone RB6-8C5 i mAb anty-MCP-1 / CCL2. Wpływ neutralizacji MCP-1 / CCL2 na napływ leukocytów do płuc w inwazyjnej aspergilozie. W celu oceny mechanizmu działania MCP-1 / CCL2 w obronie gospodarza w tej infekcji, następnie oceniano ilościowo podzbiory leukocytów płucnych w różnych punktach czasowych po prowokowaniu neutropenicznych myszy Aspergillus z neutralizacją MCP-1 / CCL2 lub bez niej. W dniach i 2 infekcji neutralizacja MCP-1 / CCL2 nie wpłynęła na liczbę monocytów / makrofagów płuc, neutrofili lub limfocytów T. Zaobserwowaliśmy wyraźne zmniejszenie liczby komórek T w płucach całkowitych i CD8 + po podaniu konidiów, zgodnych z poprzednią literaturą, wykazujących apoptozę komórek T płuca po prowokacji dopłucnej antygenami w postaci cząstek (32, 33). [podobne: bmi kalkulator dla dzieci, zostań rentierem opinie, brian tracy opinie ] [patrz też: poradnia osteoporozy warszawa, bestia z wolfsberga cda, techniki relaksacyjne dla dzieci ]