Skip to content

Potencjalna rola aktywowanego NF-kB w patogenezie zespołu eutyreozy ad 6

2 miesiące ago

274 words

Te wyniki sugerują, że aktywowany NF-kB hamuje tylko transkrypcję genów, które są pozytywnie regulowane przez T3 (takie jak 3xPal TK lub 5 (3-DI), ale nie wpływa na transkrypcję genów, które są ujemnie regulowane przez T3 (tj. , TSH-a). Brak bezpośredniego związku między TR i p65. Aby zbadać, czy zahamowanie aktywności TR przez aktywowany NF-kB wynika z związku TR i NF-kB p65 na TRE, zastosowaliśmy EMSA. Ponieważ obserwowano hamowanie zależnej od T3 aktywacji przez NF-kB, niezależnie od dodatnich struktur TRE, jako sondy stosowano zoptymalizowany TRE składający się z wywiniętej TRE (TRE-Lap). Jak pokazano na rysunku 6a, TR. związany z tym TRE jako homodimerem, a także jako heterodimer z RXR .. W obecności T3 wyeliminowano wiązanie homodimeru, ale nie heterodimer. Gdy translowane in vitro p65 inkubowano z TR. i / lub RXRy, nie obserwowano żadnego dodatkowego kompleksu lub zmniejszenia wiązania TR, nawet w obecności T3. Te wyniki sugerują, że p65 nie wiąże się bezpośrednio z TR na TRE. Figura 6 Brak powiązania TR z podjednostką NF-kB p65 w obecności lub nieobecności TRE. (a) TR i aktywna postać NF-kB, p65, nie wiążą się na TRE. EMSA za pomocą Lap-TRE ujawniło, że TR tworzy homodimer i heterodimer z RXR. Jednakże obecność p65 nie wpłynęła na wiązanie TR i nie tworzyła nowego opóźnionego kompleksu. (b) Oddziaływanie białko-białko między TR i p65 nie występuje w systemie dwuhybrydowym drożdży. Związek pomiędzy TR i RXR, lub p65 i I. B ., jest oczywisty. Dane wyrażono jako średnie. SD z potrójnych oznaczeń. AP <0,0001 vs. Gal4-DBD-TR, Gal4-AD. Aby dokładniej zbadać, czy istnieje bezpośrednia interakcja pomiędzy TR i p65, zastosowano dwuhybrydowy system drożdżowy. Gdy Gal4-DBD-TR i Gal4-AD-RXR zostały kotransformowane do komórek drożdży, aktywność. -Galaktozydazy wzrosła, odzwierciedlając połączenie dwóch białek. Silne skojarzenie p65 z I. B. został również potwierdzony przez ten system (rysunek 6b). Jednakże nie wykryto związku TR z p65, niezależnie od nieobecności lub obecności T3. System dwuhybrydowy ssaków potwierdził również, że nie było wykrywalnego związku pomiędzy TR i p65 (dane nie pokazane). Te wyniki sugerują, że hamujące działanie NF-kB, zwłaszcza p65, na działanie TR nie jest spowodowane interakcją między tymi dwoma białkami. Brak interakcji między NF-kB i TR zwiększa prawdopodobieństwo, że sekwestracja wspólnego kofaktora, takiego jak CBP, jest przyczyną zależnego od p65 hamowania aktywności TR. Jednakże, nadekspresja CBP nie przywróciła zależnej od TNF-. i zależnej od p65 inhibicji aktywacji genu reporterowego za pośrednictwem T3 przy użyciu 5 (3-DI Luc i 3xPal TK Luc (danych nie przedstawiono). CAM hamuje aktywację NF-kB i przywraca ekspresję 5 (3-Dl. Ponieważ zależny od T3 wzrost ekspresji mRNA 5 (3-Dl był hamowany przez TNF-a poprzez aktywowane NF-kB spekulowaliśmy, że hamowanie aktywacji NF-kB może przeciwdziałać TNF-a. efekt. Spośród różnych związków, które są klinicznie stosowane, stwierdzono, że jeden z antybiotyków makrolidowych, CAM, miał zahamować ekspresję prozapalnych cytokin, takich jak IL-6 (41), IL-1 p i IL-8 (42), o których wiadomo, że są podwyższone przez NF-kB. W ten sposób zbadaliśmy, czy CAM hamuje aktywację NF-kB przez TNF-a. w komórkach HepG2. Maksymalne stężenie CAM (10. 4 M) użyte w doświadczeniach zostało wybrane na podstawie stężenia tkanki, gdy CAM jest stosowany klinicznie (szczegółowo opisany w Metodach). Stosując EMSA, indukcję NF-kB godzinę po traktowaniu TNF-a zmniejszono przez preinkubację z CAM przez godzinę w sposób zależny od dawki (Figura 7a). Na poparcie tego odkrycia, wzrost aktywności NF-kB pGL3pro Luc przez TNF-a był hamowany przez równoczesne podawanie CAM (Figura 7, b i c), podczas gdy podstawowa aktywność pGL3pro Luc nie była tłumiona przez CAM (dane nie przedstawione). Wyniki te wskazują, że CAM jest skutecznym inhibitorem aktywacji NF-kB. Figura 7CAM hamuje aktywację NF-kB. (a) Hamowanie indukowanej przez TNF-. aktywacji NF-kB przez wstępne traktowanie CAM. Komórki HepG2 traktowano wstępnie CAM przez godzinę we wskazanym stężeniu. Po 1-godzinnym traktowaniu aktywacją TNF-a, NF-kB w ekstraktach jądrowych analizowano za pomocą EMSA. (b i c) Komórki HepG2 transfekowano NF-kB pGL3 Luc i traktowano TNF-a. i CAM przez 24 godziny. (b) Wartości aktywności Luc / a - gal. AP <0,0001 vs. TNF-a (+), CAM (.). (c) Zrzut indukcji przez TNF-a. AP <0,0001 vs. TNF-a (+), CAM (.). Wpływ CAM na zależne od NF-pB2 hamowanie działania TR badano stosując test przejściowej transfekcji w komórkach HepG2. [podobne: olejek arganowy gdzie kupić, brian tracy opinie, rentierstwo ] [przypisy: ośrodki leczenia uzależnień nfz, piłka do siedzenia przy biurku, olej kokosowy na włosy jak stosować ]