Skip to content

Potencjalna rola aktywowanego NF-kB w patogenezie zespołu eutyreozy ad 5

2 tygodnie ago

149 words

Zgodnie z tym stwierdzeniem, transfekcja plazmidu wykazującego ekspresję p65 hamowała aktywację 5. -DI Luc zależną od T3. Ponieważ testy genu reporterowego wymagają kotransfekcji TR, skromne działanie hamujące TNF-a w testach lucyferazy można wyjaśnić nadmiarem promotora genu docelowego, jak również TR. Inną możliwością jest to, że TNF-a wpływ na mRNA dejodyny może pośredniczyć częściowo przez sekwencje genowe, które nie są zawarte w konstrukcie lucyferazy lub, że efekt może być częściowo postprotokołu. Figura 4NF-kB indukowana przez TNF-a hamuje zależną od T3 indukcję 5 (3-Dl. Zależna od T3 indukcja aktywności 5 (3-D1-Luc została zahamowana przez NF-kB indukowany TNF-a. Zależna od T3 indukcja 5 (3-D1-Luc została również zahamowana przez transfekcję ekspresyjnego plazmidu p65. Hamowanie to zostało odwrócone przez transfekcję plazmidu eksprymującego p65 DN. (a) Wartości aktywności Luc / a – gal z T3 lub bez. AP <0,001, BP <0,0001 vs. TR, T3 (+); CP <0,0001, TR, T3 (+), TNF-a vs. TR, T3 (+), TNF-a, p65 DN. (b) Zrzut indukcji przez T3. DP <0,001, EP <0,0001 vs. TR; FP <0,0001, TR + TNF-a vs. TR + TNF-. + p65 DN. Hamowanie zależnej od T3 indukcji genów odpowiadających na T3 przez aktywowany NF-y nie jest ograniczony do genu 5 (3-Dl. Aby zbadać, czy hamujące działanie TNF-a wywołana przez T3 ekspresja genów jest specyficzna dla 5 (3-D1, zmiany w poziomach mRNA dwóch innych genów odpowiadających na T3, ME i miejscu 14, zostały określone w komórkach HepG2 w obecności T3 i / lub TNF-a. Niestety, mRNA ME nie został wykryty w komórkach HepG2 w nieobecności lub w obecności T3. Ponadto T3 nie wpływa na poziomy mRNA genu plamkowego (dane nie przedstawione). Stwierdzono również brak możliwości wykrycia mRNA ME w komórkach HepG2 (39) i brak odpowiedzi mRNA punktu 14 na T3 w linii komórkowej (40). W ten sposób wykorzystaliśmy gen reporterowy niosący TRE do zbadania, czy wpływ TNF-a jest specyficzne dla ekspresji genu 5 (3-Dl. Testy przejściowej transfekcji przeprowadzono przy użyciu genów reporterowych lucyferazy napędzanych przez zoptymalizowany TRE (3xPal TK Luc) i przez TSH-y. promotor (TSH-. Luc). Jak zaobserwowano w teście genu reporterowego dla 5 (3-Dl, kotransfekcja plazmidu z ekspresją TR była konieczna do wykazania zależnych od T3 zmian w tych aktywnościach lucyferazy. Jak pokazano na Figurze 5, a i b, wzrost 3xPal TK Luc zależny od T3 był 129-krotny po kotransfekcji z TR. Ta zależna od T3 indukcja została radykalnie zredukowana do 62-krotnie przez TNF-a. Ponadto, gdy p65 ulegało nadmiernej ekspresji, obserwowano nawet większe hamowanie (do 21-krotności); p65 DN zniosło efekt TNF-a. Nadekspresja p50 również zmniejszała zależny od T3 wzrost aktywności 3xPal TK Luc, chociaż w mniejszym stopniu. Figura 5NF-kB indukowana przez TNF-a hamuje ekspresję genu reporterowego pozytywnie regulowaną przez T3, ale nie ekspresję TSH-y Luc, który jest negatywnie regulowany przez T3. (a i b) zależna od T3 aktywacja aktywności 3xPal TK Luc była hamowana przez NF-kB indukowaną TNF-a. Zależna od T3 aktywacja 3xPal TK Luc była również hamowana przez transfekcję plazmidu eksprymującego p65 i słabo przez ekspresję p50. Hamowanie to zostało odwrócone przez transfekcję plazmidu eksprymującego p65 DN. (a) Wartości aktywności 3xPal TK Luc /. - gal. AP <0,001, BP <0,0001 vs. TR, T3 (+); CP <0,0001, TR, T3 (+), TNF-a vs. TR, T3 (+), TNF-a, p65 DN. (b) Zrzut indukcji przez T3. DP <0,001, EP <0,0001, TR + TNF-a vs. TR + TNF-. + p65 DN. (c i d) Komórki JEG-3 transfekowano TSH-a Gen Luc, a wpływ T3 i / lub TNF-a był badany. T-zależna represja TSH-y Gen Luc nie był hamowany przez NF-kB indukowany TNF-a. (c) Wartości TSH-a Luc /. - aktywność gal. (d) Procent względnej aktywności T3 Luc według T3. FP <0,0001 vs. TR (.). Wszystkie dane zostały wyrażone jako średnie. SD. Zbadaliśmy również wpływ TNF-a lub nadekspresję p65 na ekspresję TSH-y Luc przez testy przejściowej transfekcji w komórkach naczyniokomórkowych JEG-3, w których TSH-y zachowanie genu jest zachowane (rysunek 5c). W tej linii komórkowej obecność funkcjonalnego TNF-a Receptor został stwierdzony przez odkrycie, że TNF-a indukował 6,6-krotny wzrost ekspresji genu reporterowego lucyferazy reagującej na NF-kB (NF-kB pGL3pro Luc). (dane nie pokazane). Ponadto TNF-a leczenie lub transfekcja plazmidem eksprymującym p65 hamowało zależną od T3 aktywację 3xPal TK Luc w tej linii komórkowej, z 220-krotnego wzrostu przez T3 do 178 razy i 36 razy, odpowiednio (dane nie przedstawione). Jednak zależna od T3 represja TSH-a Luc nie został zmieniony przez TNF-a lub przez transfekcję plazmidem eksprymującym p65, co sugeruje, że represja TSH-a na ekspresję genu przez T3 nie miało wpływu aktywowane NF-kB [hasła pokrewne: sukces definicja, ośrodki leczenia uzależnień nfz, piłka do siedzenia przy biurku ] [przypisy: jak sobie poradzić po rozstaniu, ćwiczenia z hantlami na klate, laserowe usuwanie zylakow ]