Skip to content

Inhibitor IL-13 blokuje rozwój zwłóknienia wątroby podczas dominującej reakcji zapalnej typu T-helper typu 2 ad 6

4 tygodnie ago

765 words

Dlatego w kolejnych doświadczeniach badaliśmy wzory ekspresji mRNA prokolagenu I (Col I) i prokolagenu III (Col III), aby określić, czy indukowanemu przez sIL-13R2 2-Fca zmniejszenie zwłóknienia towarzyszyły bezpośrednie zmiany w ekspresji tych 2 ważnych genów produkujących kolagen (13). Tutaj blokada IL-13 znacząco zmniejszała ekspresję mRNA dla Col I i Col III zarówno u myszy z niedoborem WT i IL-4 (3 (Figura 4). Nie obserwowano zmian w indukowanych infekcją poziomach mRNA Col I i Col III u myszy z niedoborem IL-4 (3 w porównaniu z WT, i w porównaniu z myszami WT traktowanymi sIL-13R2-2-Fc, nie było dalszego zmniejszenia podobnie traktowane myszy z niedoborem IL-4 (3. Figura 4 Ekspresję mRNA kolagenu I i kolagenu III zmniejsza się w wątrobach zainfekowanych myszy traktowanych sIL-13R2-2-Fc2, ale nie ma na nią wpływu niedobór IL-4 (4KO). Przeprowadzono analizę RT-PCR dla kolagenu I i III, jak opisano w legendzie do fig. 3. Dane te zostały powtórzone w odrębnym badaniu. IL-13 stymuluje wytwarzanie kolagenu w mysich fibroblastach 3T3. Wykazawszy, że blokada IL-13 in vivo znacząco zmniejsza ekspresję mRNA dla Col I i Col III w wątrobie zainfekowanych myszy z niedoborem WT i IL-4 (3, chcieliśmy ustalić, czy IL-13 będzie bezpośrednio stymulować odkładanie kolagenu w fibroblastach. Aby odpowiedzieć na to pytanie, zbadaliśmy indukcję kolagenu typu I w mysich fibroblastach 3T3 przy użyciu metody Western blotting. Jak pokazano na Figurze 5, indukowana przez IL-13 synteza kolagenu 48 godzin po ekspozycji. Minimalny kolagen typu I wykryto w niestymulowanych komórkach (Figura 5a, ścieżka 1) i we wcześniejszych punktach czasowych w hodowlach aktywowanych cytokinami (dane nie przedstawione). IL-4 indukowała również syntezę kolagenu I (ścieżka 2), a wysokie poziomy wydzielanego kolagenu były łatwe do wykrycia w supernatantach otrzymanych z obu stymulowanych cytokinami hodowli (dane nie przedstawione). Nie zaobserwowaliśmy znaczącej różnicy w zdolności IL-4 i IL-13 do stymulacji ekspresji kolagenu I. Swoistość reakcji potwierdzono przez zastosowanie oczyszczonego kolagenu typu I (linia 5), a traktowanie kolagenazą bakteryjną wykazało, że przeciwciała były specyficzne dla kolagenu typu I, w tym. i . łańcuchy (dane nie pokazane). Figura 5IL-13 indukuje syntezę kolagenu typu I w mysich fibroblastach 3T3. Komórki stymulowano pożywką (ścieżka 1), rIL-4 przy 1000 U / ml (linia 2) lub rIL-13 w stężeniu 20 ng / ml (ścieżki 3 i 4) przez 48 godzin. Całkowite lizaty komórkowe rozdzielono na 6% SDS-PAGE w warunkach redukujących, przeniesiono na błonę nitrocelulozową i sondowano króliczym IgG anty-mysim kolagenem typu I. Przeciwciało przeciw kolagenowi typu I identyfikuje oczyszczony kolagen typu I, w tym kolagen A 11 (I), 12 (I) i A (I), 2 (I), które rozdzielono na ścieżce 5 (a). Specyficzność testu potwierdzono przez trawienie kolagenazą w oddzielnych doświadczeniach. (b) Wartości densytometryczne (arbitralne jednostki pikseli). Dyskusja Wzór cytokinowy typu CD4 + Th2 dominuje w odpowiedzi immunologicznej u myszy zakażonych S. mansoni (6, 7). Poprzednie badania zubożające IL-4 i eksperymenty z myszami z niedoborem IL-4 (3 nie wykazały jednak nieodzownej roli tej cytokiny w patogenezie schistosomatozy (8, 9, 17, 18). Rzeczywiście, podczas gdy w niektórych badaniach zaobserwowano częściową redukcję zwłóknienia (9), tworzenie ziarniniaka indukowanego przez komórki jajowe mogło przebiegać całkowicie bez obecności IL-4 (8,17, 18). W przeciwieństwie do tych obserwacji, powstawanie ziarniniaków i rozwój zwłóknienia wątroby były poważnie upośledzone u myszy z niedoborem Stat6 (10), które wykazują poważną wadę w produkcji kilku cytokin związanych z Th2 (39). IL-4 i IL-13 aktywują szlak sygnalizacji Stat6. W związku z tym widoczne różnice w patologii obserwowane pomiędzy zakażonymi myszami z niedoborem IL-4 (3 a myszami z niedoborem Stat6 mogą być wyjaśnione przez IL-13. Niemniej jednak, wyraźny udział IL-4 i IL-13 w progresji choroby nie może być stwierdzony w badaniach na myszach z niedoborem Stat6, IL-4Ra lub IL-4a. W tym badaniu użyliśmy silnego inhibitora IL-13 u zakażonych myszy z niedoborem WT i IL-4 (3 i wykazaliśmy, że IL-13 i IL-4 wykazują zbędne, jak również unikalne, role w patogenezie schistosomatozy. W kilku badaniach wykazano, że odpowiedzi cytokin typu Th2 mogą rozwijać się in vivo w nieobecności IL-4 lub receptora IL-4 (19, 28), co jest zgodne z naszymi ustaleniami, że poziomy IL-13, IL-10, a IL-5 były znacznie zmniejszone, ale nadal były znacząco wykrywalne w MLN (Figura 2) i wątrobach (Figura 3) zainfekowanych myszy z niedoborem IL-4 (3. Ich produkcja była również wysoce zależna od odpowiedzi komórek T CD4 + (Figura 2), co dodatkowo wskazuje, że ustalono typową odpowiedź typu Th2
[więcej w: piłka do siedzenia przy biurku, jak sobie poradzić po rozstaniu, brian tracy opinie ]
[przypisy: bestia z wolfsberga cda, techniki relaksacyjne dla dzieci, zioła na odchudzanie ojca klimuszko ]