Skip to content

Ekspresja funkcjonalnych receptorów chemokiny CXCR4 na ludzkich komórkach nabłonka okrężnicy ad 5

2 tygodnie ago

764 words

Komórki HT-29 były głodzone w surowicy przez 24 godziny, a następnie stymulowane mM lub 5 mM maślanem sodu, jak pokazano przez 3. 24 godziny. RNA ekstrahowano jak opisano w Methods i analizowano metodą Northern blotting. Bloty sondowano dla mRNA CXCR4 (górny panel) i (3-aktyny, aby wykazać równe obciążenie. Przedstawiony wynik jest reprezentatywny dla 3 podobnych eksperymentów. Ekspresja chemokin w prawidłowych ludzkich komórkach okrężnicy i HT-29. Wcześniej wykazaliśmy, że komórki HT-29 stymulowane prozapalnymi cytokinami mogą wydzielać szereg chemokin, w tym IL-8, MCP-1 i RANTES (23). Analizując za pomocą 35 cykli RT-PCR stwierdzono, że niestymulowane komórki HT-29 pozbawione surowicy wykazują ekspresję MCP-1, MCP-3, MIP-1 (3, IL-8 i IP-10 z bardzo niską ekspresją MIG i SDF-1. mRNA. Po stymulacji IL-1 p, TNF-a i IFN-y, mocniejsze prążki wykryto dla MCP-1, IL-8 i Mig. Chemokiny MCP-4 i SDF-1. były obecne jako słabe pasma lub w ogóle. Tak więc, komórki HT-29 mają receptor CXCR4, ale nie eksprymują jego ligandu, SDF-1. (Figura 6). SDF-1. mRNA również nie można było wykryć w preparacie ludzkich białych krwinek, ani nie było wyrażane przez oczyszczone limfocyty T lub blasty T (dane nie pokazane). Główne źródło SDF-1. mRNA jest ludzkimi komórkami zrębowymi szpiku kostnego, o których wiadomo, że konstytutywnie wytwarzają tę chemokinę (24). Figura 6Chemokina w komórkach HT-29 i ludzkiej okrężnicy. Górne 2 panele pokazują ekspresję mRNA chemokiny przez komórki nabłonka okrężnicy przy użyciu analizy RT-PCR traktowanych komórek HT-29. Komórki HT-29 były głodzone w surowicy przez 24 godziny, a następnie pozostawione bez leczenia przez dodatkowe 6 godzin (oznaczone jako 1) lub traktowane przez 6 godzin IL-1 p, TNF-a i IFN-y. (3 ng / ml, 30 ng / ml, 100 U / ml, odpowiednio) (oznaczone liczbą 2). Przygotowano mRNA i przeprowadzono analizę PCR, jak opisano w Methods. Mieszany preparat leukocytów zastosowano jako kontrolę pozytywną (C) dla wszystkich par starterów z wyjątkiem SDF-1 (3, gdzie komórki zrębu ludzkiego szpiku kostnego zastosowano jako kontrolę pozytywną. Dolne 2 panele pokazują analizę RT-PCR ekspresji mRNA chemokiny w ludzkich biopsjach okrężnicy pobranych od 2 pacjentów z normalną nieprzepaloną okrężnicą (oznaczoną liczbami 3 i 4). Ekspresję chemokin badano również w normalnych ludzkich biopsjach okrężnicy; wyniki przedstawiono na dwóch dolnych panelach na fig. 6. W próbkach okrężnicy można było wykryć następujące chemokiny: MCP-1, MCP-3, MCP-4, RANTES, MIP-1 ., IP-10, Mig i SDF -1 .. IL-8 nie ulegała ekspresji w tej niezapalanej tkance. Można również wykryć receptor CXCR4. Obecność SDF-1. mRNA w tkance okrężnicy wskazuje, że komórki nabłonka in vivo będą prawdopodobnie eksponowane na ligand dla CXCR4. Różnice między komórkami nabłonkowymi HT-29 i biopsjami mogą odzwierciedlać fakt, że próbki biopsyjne zawierają inne typy komórek oprócz komórek nabłonka, głównie fibroblastów i śródnabłonkowych limfocytów T. Normalne ludzkie komórki nabłonka okrężnicy wyrażają białko CXCR4. Aby określić, czy ekspresja CXCR4 obserwowana w komórkach HT-29 była unikalna dla tej rakowej linii komórkowej lub cechy. Realnej. także nabłonek okrężnicy, ludzkie wycinki okrężnicy barwiono przeciwciałem przeciwko CXCR4. We wszystkich przypadkach niezapalonej błony śluzowej okrężnicy (n = 20) komórki nabłonka okrężnicy wyrażały znaczące ilości receptora chemokiny CXCR4 na powierzchni błony śluzowej i krypt. Co ciekawe, barwienie było najsilniejsze w komórkach nabłonkowych u podstawy krypty (ryc. 7, aib). Ekspresję CXCR4 obserwowano również w leukocytach blaszki właściwej, jak oczekiwano, i komórkach śródbłonka, jak opisano wcześniej (25). Ponadto, we wszystkich przypadkach (n = 14) zapalnej błony śluzowej od pacjentów z wrzodziejącym zapaleniem okrężnicy, komórki nabłonka okrężnicy wyrażały CXCR4; znowu, barwienie było najsilniejsze w komórkach krypt. Pacjenci z wrzodziejącym zapaleniem jelita grubego mieli duży naciek zapalny błony śluzowej i obserwowano tutaj wiele komórek dodatnich pod względem CXCR4 (Figura 7c). Nie obserwowano barwienia w sąsiednich sekcjach, gdy użyto przeciwciała kontrolnego izotypu (Figura 7d). Oprócz okazów jelita grubego badano również biopsje z sąsiedniego końcowego jelita krętego. Jelitowe komórki nabłonkowe z jelita cienkiego również wyrażały receptor chemokiny CXCR4 (Figura 7e). Ryc. 7 Immunohistochemia ludzkiej biopsji okrężnicy. Próbki ludzkiej śluzówki okrężnicy badano immunohistochemicznie pod kątem obecności CXCR4 przez barwienie przeciwciałem 12C5 anty-CXCR4. (a) Ekspresja CXCR4 w normalnym nabłonku okrężnicy, komórkach śródbłonka i komórkach blaszki właściwej (x 10). (b) Normalny nabłonek okrężnicy. Barwienie z powodu ekspresji CXCR4 jest bardziej intensywne w komórkach u podstawy krypty (× 40)
[patrz też: sukces definicja, zapalenie migdałków leczenie, aparat ortodontyczny na raty ]
[patrz też: urolog dziecięcy rzeszów, jak sobie poradzić po rozstaniu, ćwiczenia z hantlami na klate ]