Skip to content

Dysfunkcja śródbłonka w mysim modelu łagodnej hiperhomocysty (e) cd

1 tydzień ago

587 words

Maksymalny skurcz oznaczono przy użyciu 10. Mol / L fenylefryny, po czym pierścień przemyto roztworem Krebsa. Naczynia odstawiono do około połowy maksymalnego skurczu, zwykle wymagającego 0,1. M fenylefryny. Po ustabilizowaniu skurczu mierzono relaksację w odpowiedzi na łączny dodatek acetylocholiny (10. 9. 10. 5 M) lub nitroprusydku sodu (10. 9. 10. 5 M). Badania mikrokrążenia krezkowego. Reaktywność naczyniowa w krążeniu krezki oceniano in vivo przy użyciu wideomikroskopii (21). Myszy znieczulono ketaminą i ksylazyną (odpowiednio 40 i 8 mg / kg) przez wstrzyknięcie dootrzewnowe. Temperaturę ciała, monitorowaną za pomocą sondy doodbytniczej, utrzymywano na poziomie 37 ° C z ogrzewaną platformą aparatu wideomikroskopowego i lampą grzejną. Fragment jelita cienkiego delikatnie usunięto przez małe, środkowe nacięcie brzucha. Sieć została naniesiona na szkiełko nakrywkowe na wsporniku do wideomikroskopii. Preparat poddano ciągłej superfuzji 0,15 M NaCl (przy ml / min) ogrzanej do 37 ° C. Krążenie krezki uwidoczniono za pomocą mikroskopu Nikon Optip Hot-2 (soczewka obiektywu 40 × zanurzonego w wodzie) i obraz wyświetlany na monitorze HR-1000 (Dage-MTI, Inc., Michigan City, Indiana, USA) przy użyciu Attofluor high aparat o dużej gęstości (Atto Instruments Inc., Rockville, Maryland, USA). Końcowy obraz ekranu został powiększony 64 000 ×. Pojedynczą arteriolę krezkową (o średnicy 20-303 m) wybrano i użyto do pomiarów podczas każdego eksperymentu. Wewnętrzną średnicę światła tętnicy krezkowej mierzono za pomocą aparatu wideocaliper (Microcirculation Research Institute, Texas A & M College of Medicine, College Station, Texas, USA). Średnicę naczynia mierzono w punkcie wyjściowym i w odpowiedzi na dodanie agonistów do supilusatu po okresie równoważenia wynoszącym 5 minut. Krzywe zależności odpowiedzi od stężenia oznaczono dla metacholiny, bradykininy, A23187 i nitroprusydku sodowego (10. 7. 10. 4 M). Przed każdą dawką agonisty, sieć była przemywana solą fizjologiczną i potwierdzano przywrócenie podstawowej średnicy naczynia. Odpowiedź wyrażono jako procentową zmianę średnicy naczynia w porównaniu z wartością wyjściową. Przemyciliśmy również krezkę za pomocą dysmutazy ponadtlenkowej Cu / Zn przy 150 U / ml w celu oceny wpływu tego środka na dysfunkcję śródbłonka w odpowiedzi na 10 ^ 4M metacholiny. W oddzielnych badaniach określono hemodynamiczne efekty superfuzji metacholiny lub nitroprusydku sodu. Cewnik umieszczono w tętnicy szyjnej wewnętrznej znieczulonego zwierzęcia, a ciśnienie krwi monitorowano za pomocą jednorazowego przetwornika ciśnienia COBE (COBE Laboratories, Lakewood, Colorado, USA) i rejestrowano na rejestratorze wykresu trawiastego Grassa (Grass Instruments, Quincy, Massachusetts, USA). Cykliczne poziomy monofosforanu guanozyny. Cykliczną zawartość monofosforanu guanozyny (cGMP) mierzono w izolowanych torakach piersiowych, jak opisano wcześniej (22). Torakowatą aortę zebrano od znieczulonych myszy i natychmiast umieszczono w lodowatym roztworze Krebsa. Luźną tkankę łączną przydanki usunięto, a naczynie ostrożnie nacięto wzdłuż jej długości, aby odsłonić powierzchnię śródbłonka. Naczynie umieszczono w roztworze Krebsa w 37 ° C i napowietrzano za pomocą 95% O2 ~ 5% CO2 przez 30 minut. Naczynie poddano wstępnej obróbce za pomocą 0,1. M fenylefryny przed wystawieniem na działanie 1. Mol / l acetylocholiny przez minutę. Aortę szybko zamrożono w ciekłym azocie i przechowywano w temperaturze około 80 ° C. Tkankę homogenizowano za pomocą 6% lodowatego kwasu trichlorooctowego i wirowano przy 2000 g przez 5 minut w temperaturze 4 ° C. Wytrącony kwas trichlorooctowy solubilizowano z NaOH i stosowano do oznaczenia białka. Cykliczną zawartość GMP w supernatancie mierzono stosując komercyjnie dostępny test immunologiczny (Cayman Chemical Co., Ann Arbor, Michigan, USA) zgodnie z instrukcjami producenta. Zawartość wodoronadtlenku 8-izoprostanu / fosfolipidu w tkankach. Myszy uśmiercono i osocze uzyskano przez odwirowanie krwi zebranej w probówkach zawierających EDTA. Próbki tkanki zebrano, natychmiast zamrożono w ciekłym azocie i przechowywano w temperaturze <80 ° C. Pomiar izoprostanu 8-epi-PGF2. (8-IP) oczyszczono z próbek osocza, wątroby i aorty stosując komercyjnie dostępny test immunologiczny (Cayman Chemical Co., Ann Arbor, Michigan, USA) zgodnie z instrukcjami producenta. Pomiar poziomów wodoronadtlenku fosfolipidów w tkance wątrobowej przeprowadzono za pomocą HPLC stosując kolumnę LC-Si, jak opisano poprzednio (23). Wytwarzanie nadtlenku aorty. Wytwarzanie anionów ponadtlenkowych mierzono za pomocą chemiluminescencji lucigenin (24) [patrz też: olejek arganowy gdzie kupić, zostań rentierem opinie, marek kamiński blog ] [hasła pokrewne: techniki relaksacyjne dla dzieci, zioła na odchudzanie ojca klimuszko, bmi kalkulator dla dzieci ]