Skip to content

Białka surfaktantowe A i D chronią myszy przed nadwrażliwością płuc indukowaną przez antygeny i alergeny Aspergillus fumigatus cd

2 miesiące ago

410 words

RSP-D zbadano także pod względem wiązania z cukrami prostymi, fosfolipidami i maltozylo-BSA, jak opisano wcześniej (14). Ilość endotoksyny obecnej w preparatach rSP-D oszacowano tak, jak opisano powyżej dla natywnych preparatów SP-A i SP-D i stwierdzono, że wynosi 42 pg / (ig rSP-D. Immunizacja myszy. Myszy podzielono na dziesięć grup, z ośmioma myszami w każdej grupie (nieleczone myszy ABPA, nieleczone myszy kontrolne, myszy ABPA traktowane SP-A (3, myszy kontrolne traktowane SP-A (3, myszy ABPA traktowane SP-D p, SP-D. traktowane myszy kontrolne, myszy ABPA traktowane rSP-Dp, myszy kontrolne traktowane rSP-Dp, myszy ABPA traktowane BSA i myszy kontrolne traktowane BSA). Mysi model nadwrażliwości płucnej przygotowano jak opisano wcześniej (15) i nazwano myszami ABPA. dla wygody opisowej. Pokrótce, zwierzęta w grupach myszy ABPA lekko znieczulono eterem i powoli dodano 50 .l (100 .g) mieszaniny antygenów na mysz za pomocą mikropipety ze sterylną jednorazową końcówką. Po zaszczepieniu zwierzęta trzymano w pozycji pionowej przez kilka minut, aż cały antygen przyłożony do nozdrza został całkowicie wdychany. Myszy te otrzymały również 100 .l (200 .g) tej samej mieszaniny antygenów na mysz dootrzewnowe. Podawanie donosowe i iniekcje dootrzewnowe były podawane dwa razy w tygodniu każdej myszy przez 4 tygodnie (28 dni). Ostatnią immunizację antygenem przeprowadzono 28 dnia (nazwanego dniem 0 dla badania leczenia), a następnie traktowano białkami surfaktantowymi lub BSA (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri, USA) przez następne 3 dni ( dzień 1, 2 i 3 badania leczenia). Myszy w grupach kontrolnych immunizowano identycznie, ale sterylnym PBS. Podawanie SP-A, SP-D i rSP-D. Grupy nieleczonych myszy ABPA i nieleczonych myszy kontrolnych podawano donosowo 50 .l PBS w dniach 1, 2 i 3. Grupy myszy otrzymujących leczenie nazwano po podaniu odpowiednich białek. Ludzki SP-A (3 .g w 50 .l PBS na mysz) podawano donosowo myszom ABPA traktowanym SP-A (3 i myszom kontrolnym traktowanym SP-A (3 w dniach 1, 2 i 3. Ludzki SP-D ( .g w 50 .l PBS na mysz) podawano donosowo myszom ABPA traktowanym SP-Dp i myszom kontrolnym potraktowanym SP-Dp w dniach 1, 2 i 3. RSP-D (1 .g in. 50 .l PBS na mysz) podawano donosowo grupom myszy ABPA traktowanych rSP-Dp i myszy kontrolnych traktowanych rSP-Dp w dniach 1, 2 i 3. BSA (3 .g w 50 .l PBS na mysz) podawano donosowo myszom ABPA traktowanym BSA i grupom myszy kontrolnych otrzymujących BSA w dniach 1, 2 i 3. Wybrana dawka SP-A i SP-D była oparta na fizjologicznych stężeniach tych białek, zgłoszonych w płukanie płuc płuca: stężenie SP-A w płukaniu szczurów wynosiło 7,3. 0,8 .g / ml i zaobserwowano, że stężenie SP-D w popłuczynach z myszy C57B1 / 6 w wieku 6 <8 tygodni wynosi 552 ng / ml (16,17). W płukaniu płuca przez ludzi stężenie SP-A wynosi od do 10 .g / ml, a stężenie SP-D wynosi od 300 ng do 600 ng / ml (7, 18). Af u-IgG i Afu-IgE u myszy. Poziomy Afu-IgG i Afu-IgE w surowicy mierzono testem ELISA, jak opisano wcześniej (19). Rozcieńczenia surowicy stosowane do oceny IgG i IgE wynosiły odpowiednio 1:50 (vol / vol) i 1:25 (vol / vol). Koniugat peroksydazy białkowej A (dla IgG) i koniugat przeciwko mysiej IgE peroksydazy (dla IgE) zastosowano w rozcieńczeniach 1: 1000 (vol / vol). Eozynofilia we krwi obwodowej. Eozynofile policzono na hemocytometrze, stosując .l heparynizowanej krwi wybarwionej 9 .l odczynnika Dungera (wodny roztwór zawierający 0,1% wag./obj. Eozyny, 10% obj./obj. Acetonu i 0,1% wag./obj. Na2CO3. ). Przygotowanie zawiesiny pojedynczych komórek z płuc. Płuca izolowano od myszy i homogenizowano w pożywce RPMI-1640 zawierającej 10% (obj./obj.) Surowicy bydlęcej o stężeniu 5 x 105 komórek / ml. Test peroksydazy eozynofilowej. W teście peroksydazy eozynofiliowej (EPO) zawiesinę komórek płuc (200 ul / studzienkę) wysiano na 96-dołkowej płytce do hodowli tkankowej i inkubowano w inkubatorze z nawilżonym CO2 w 37 ° C przez 48 godzin. Pożywkę odessano i dodano o-fenylenodiaminę (OPD) (100 ul mM roztworu wytworzono przy użyciu jałowego PBS zawierającego 0,1% obj./obj. Triton X-100 i 0,0125% obj./obj. H2O2). Po 30-minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej reakcję barwną zakończono przez dodanie 50 .l 4 N H2SO4 i zmierzono A490. Cytokiny w hodowlach śledziony. Śledziony myszy uśmierconych w różnych odstępach czasu zbierano w warunkach aseptycznych. Narządy zmielono i komórki zawieszono w pożywce hodowlanej (2 x 106 komórek / studzienkę) i umożliwiono namnażanie w pożywce RPMI-1640 z 10% (obj./obj.) Surowicy bydlęcej i 10 .g / ml gentamycyny [więcej w: olejek arganowy gdzie kupić, poradnia osteoporozy warszawa, marek kamiński blog ] [patrz też: poradnia osteoporozy warszawa, bestia z wolfsberga cda, techniki relaksacyjne dla dzieci ]